Jos tarvitset apua, ota rohkeasti yhteyttä
Proteiinin pyöreä dikroismispektrisi näytti täydelliseltä eilen. Nykyään peruskäyrät ovat ylöspäin alle 215 nm:n, signaali-kohinasuhde on romahtanut, ja toissijaisen rakenteen sovitus sanoo, että alfa-heliksi on pudonnut 40 prosentista 25 prosenttiin. Mikään näytteessä ei muuttunut. Tavallinen epäilty istuu näytetelineessä: kvartsikyvetti, joka ei ole puhdas. Kvartsikyvettien puhdistaminen CD-spektroskopiaa varten on rutiinivaihe, jonka laboratoriot aliarvioivat, ja se on ensimmäinen paikka katsoa, kun tietojen laatu heikkenee odottamatta.
Ydinpäätelmä voidaan todeta heti alkuun: kyvetti, joka näyttää täysin puhtaalta näkyvillä aallonpituuksilla, voi silti olla katastrofaalisesti likainen 190-230 nm:ssä, missä suurin osa proteiini-CD-mittauksista tehdään. Ero käyttökelpoisen perusviivan ja pilaantuneen spektrin välillä on usein liian ohut kalvo nähdäkseen. Tässä oppaassa kerrotaan, miksi CD-spektroskopia on ainutlaatuisen herkkä kyvetin kunnon suhteen, kuinka tunnistaa jokainen epäpuhtaustyyppi, mikä puhdistusmenetelmä palauttaa optisen pinnan, mitkä virheet aiheuttavat pysyviä vaurioita ja kuinka varmistetaan, että kyvetti on todella valmis mittaukseen.
Alla olevat protokollat ovat käytännön menetelmiä, joita käytetään rutiininomaisessa proteiinibiofysiikkatyössä. Ne ovat yhteensopivia minkä tahansa hyvämaineisen kvartsikyvettivalmistajan kvartsi- ja sulatettu piidioksidikyvettien kanssa, ja ne tilataan vähiten aggressiivisesta päivittäisestä huuhtelusta syvempään dekontaminointivaiheeseen, jota käytetään vain silloin, kun rutiinipuhdistus ei riitä.
Pyöreädikroismi mittaa pientä eroa absorptiossa vasemman ja oikean ympyräpolarisoidun valon välillä. Tyypillinen kymmenen milliasteen CD-kaista vastaa noin 3 x 10^-4 AU:n absorbanssieroa, joka on kymmenestä sataan kertaa pienempi kuin rutiininomaiseen UV-Vis-spektriin tallennetut absorptiokaistat. Mikä tahansa kyvetin optinen artefakti ei siis ole pieni korjaus; se on kilpaileva signaali, joka voi ylittää todellisen spektrin. Tämä herkkyys johtuu siitä, että puhtaat kyvetit ovat edellytys kelvolliselle CD-datalle, eivät yksityiskohta, joka on optimoitava myöhemmin.
Kauko-UV-alue kuormittaa optista materiaalia. Alle 200 nm:ssä vesi, liuennut happi ja jopa erittäin puhtaat puskurikomponentit imeytyvät huomattavasti. Sulatetun piidioksidi-ikkunan on läpäistävä mahdollisimman paljon jo rajoitetusta valosta. Likainen tai vaurioitunut ikkuna vähentää fotonivirtaa, pakottaa ilmaisimen suurempaan vahvistukseen ja lisää kohinaa nopeammin kuin useimmat muut spektroskopiatekniikat. Käytännössä kauko-UV CD alle 210 nm on vaativin kyvettisovellus, jonka laboratorio kohtaa.
Kyvetin kunto vaikuttaa CD-tietoihin neljän riippumattoman mekanismin kautta. Ensinnäkin absorboiva kalvo vähentää läpäisevää valoa ja nostaa valomonistimen dynodijännitettä. Toiseksi hiukkaset ja mikronaarmut sirottavat valoa, joka havaitaan perusviivan siirtymäksi ja kohina. Kolmanneksi mekaaninen jännitys tai syövytys kvartsissa saa aikaan kahtaistaitetta, joka muuntaa lineaarisesti polarisoidun valon näennäiseksi elliptiseksi artefaktiksi. Neljänneksi karkea tai kerrostunut pinta muuttaa tehollista polun pituutta, josta säde todella ottaa näytteitä. Jokainen mekanismi johtaa erilaiseen vikakuvioon spektrissä, minkä vuoksi järjestelmällinen puhdistusstrategia on välttämätön.
Kyvetin materiaalin valinta määrää, kuinka pitkälle UV-säteilyyn instrumentti voi mennä. JGS1-luokan synteettinen fuusioitu piidioksidi on läpinäkyvää alle 180 nm:ssä ja on standardi proteiinin kauko-UV CD:lle. Luonnollinen sulatettu kvartsi, joka on nimetty JGS2:ksi, läpäisee kohtuullisesti noin 200 nm:iin ja on hyväksyttävä lähes UV-CD- ja rutiini-UV-Vis-työhön. JGS3-kvartsi on optimoitu infrapunasiirtoon, eikä sillä ole tilaa CD-kyvetissä. Borosilikaattilasi absorboi voimakkaasti alle noin 320 nm:n ja on täysin sopimaton CD:lle.
| Materiaaliluokka | Käytännöllinen pienempi aallonpituus | Tyypillinen CD-käyttö |
|---|---|---|
| Synteettinen sulatettu piidioksidi (JGS1) | 170-180 nm | Proteiinien, peptidien ja nukleiinihappojen kauko-UV CD alle 200 nm |
| Sulatettu kvartsi (JGS2) | Noin 200 nm | Lähes UV-CD ja rutiini UV-Vis -mittaukset |
| Infrapuna optinen kvartsi (JGS3) | Noin 250 nm | Ei suositella UV-CD:lle |
| Borosilikaattilasi | Noin 300-320 nm | Ei sovellu CD- tai alle 320 nm:n UV-mittauksiin |
Puhdaskin kyvetti voi olla käyttökelvoton, jos ikkuna on naarmuuntunut. Naarmut hajottavat valoa ja luovat paikallisia vaihteluita polun pituuteen; ne keräävät myös epäpuhtauksia seuraavan puhdistusjakson aikana, ja niitä on lähes mahdotonta poistaa. Siksi puhdistaminen on erottamaton käsittelystä: huolimaton käyttö aiheuttaa vahinkoa, joka saa parhaan protokollan epäonnistumaan.
Jopa silloin, kun kyvettejä käytetään yksinomaan erittäin puhtaan veden ja HPLC-luokan puskureiden kanssa, kontaminaatiokalvot kerääntyvät. Itse biologiset näytteet ovat yleisin lähde, koska proteiinit, peptidit, nukleiinihapot ja lipidit pyrkivät adsorboitumaan fuusioituneisiin piidioksidipintoihin. Ihokosketus, laboratorion ilmapiiri ja jopa pakkausmateriaalit lisäävät omat kerrostumansa. Kalvon tyypin tunnistaminen on hyödyllistä, koska jokainen kontaminaatioluokka reagoi eri puhdistuskemiaan.
| Epäpuhtaus | Tyypillinen lähde | Näkyvä merkki | Tyypillinen vaikutus CD-spektriin |
|---|---|---|---|
| Proteiinikalvo | Proteiininäytteet jätetään kuivumaan; adsorptio mittauksen aikana | Yleensä näkymätön | Kalteva perusviiva ja nouseva absorptio alle 230 nm; vääriä negatiivisia vyöhykkeitä lähellä 218 nm |
| Lipidi- tai hydrofobinen kalvo | Liposomit, seerumit, pehmitinuutteet | Vesihelmiä ikkunassa | Sironta ja peruskohina; epätasainen meniski |
| Puskurisuolan kiteitä | Pisaroiden tai runsaasti suolaa sisältävien näytteiden haihtuminen | Valkoisia kiteisiä täpliä kasvoilla | Vahva laajakaistan absorptio ja sironta; rosoinen perusviiva |
| Sormenjäljet | Käsittely ilman käsineitä | Heikko tahra, usein huomaamaton | Voimakas absorptio alle 250 nm; perusviivan siirtymä ja näennäinen elliptisyys |
| Pöly ja kuidut | Ilma, paperipyyhkeet, avatut kyvettilaatikot | Näkyviä hiukkasia ikkunassa | Rayleigh-sironna, kohinapiikit, vähentynyt käyttökelpoinen signaali |
| Liuottimen jäännös | Epätäydellinen huuhtelu liuotinpesun jälkeen | Ei mitään | Aallonpituudesta riippuvat absorptiokaistat liuottimesta riippuen |
Ymmärtääksesi, miksi siivouskurilla on merkitystä, pohdi, mitä ohut kontaminanttikalvo todella tekee CD-levyn kannalta merkityksellisellä aallonpituudella. Alla olevat palkit osoittavat edustavia näennäisiä absorbanssiarvoja, jotka on lisätty 220 nm:ssä kvartsikyvettiin jääneiden erilaisten kontaminanttityyppien avulla. Tämä aallonpituus on kauko-UV-alueen sisällä, jossa peptidikromofori tuottaa vahvimmat CD-signaalinsa. Arvot ovat havainnollistavia ja perustuvat menetelmäkehityslaboratorioista raportoituihin havaintoihin. Lue ne käytännön arvosanaksi: mitä suurempi lisätty imukyky, sitä aggressiivisemmin epäpuhtaudet on poistettava puhdistuksen aikana.
Sormenjäljet ovat vahingollisin yleinen epäpuhtaus, mikä on yllättävää monille käyttäjille. Ihon eritteet sisältävät aminohappoja, ureaa ja rasvahappoja, jotka imeytyvät voimakkaasti alle 250 nm:ssä. Yksi vahingossa tapahtuva kosketus optiseen pintaan voi lisätä yli 0,1 AU:ta 220 nm:ssä. Proteiinikalvot ovat toisella sijalla, ja ne ovat salakavalimpia, koska yksikerros on silmälle näkymätön. Jopa yksikerroksinen proteiinikalvo tuottaa kalteva perusviiva amidialueella. Kaltevuus erehtyy usein instrumenttien ajautumiseen tai puskureiden yhteensopimattomuuteen. Suolakiteet ja pöly toimivat pääasiassa sirontakeskuksina eikä absorboivina. Sironta aiheuttaa kohinaa ja pystypoikkeamaa, jota ei voida poistaa yksinkertaisella tyhjällä vähennyksellä. Liuotinjäämät ovat helpoimmin korjattavissa oleva ongelma, mutta sen esiintyminen yleensä viittaa siihen, että huuhteluvaihe oli kiireinen. Kaavion absoluuttiset arvot ovat edustavia, eivät yleisiä; ne riippuvat kalvon paksuudesta, tarkasta aallonpituudesta ja kyvetin reitistä. Tärkeää on suuruusluokka: kontaminantit alueella 0,05 - 0,1 AU erottavat tasaisen CD-perusviivan sellaisesta, joka kallistuu käyttöalueen ulkopuolelle. Käytännön ominaisuus on, että visuaalisesti täydellinen kyvetti voi silti olla likainen kauko-UV:ssa, joten todentaminen ei ole koskaan valinnaista.
Vertailubetonin tekemiseksi hyvin hoidetun vedellä täytetyn kvartsikyvetin perustason poikkeaman tulisi olla alle 0,01 AU 220 nm:ssä. Kun poikkeama ylittää 0,05 AU:ta, CD-spektri näyttää kohonneen, kohinaisen perusviivan alle 220 nm:ssä, ja toissijaisen rakenteen dekonvoluutio muuttuu epäluotettavaksi. Referenssiproteiinispektrien tietokannat olettavat, että kyvetin osuus on mitätön; näiden olosuhteiden toistaminen edellyttää samaa puhdistusta, jota vertailulaboratoriot käyttävät.
Päivittäinen protokolla on suunniteltu yhteen tarkoitukseen: näytteen poistamiseen ennen kuin se ehtii adsorboitua pysyvästi. CD-levyillä käytettävien kyvettien puhdistaminen on osa mittaustyönkulkua, ei satunnaista työtä. Jokaisen mittauksen jälkeen oikein huuhdeltu kyvetti tarvitsee harvoin aggressiivista syväpuhdistusta. Koko jakso kestää noin viisi minuuttia, ja siinä käytetään vain reagensseja, jotka ovat turvallisia sulatetulle piidioksidille.
Useat käytännön seikat tekevät eron täydellisen perusviivan ja marginaalisen välillä. Tyhjennä kyvetti aina pipetillä kaatamisen sijaan. Käytä suuria määriä: 10 tilavuuden huuhtelu tarkoittaa kymmenen kertaa kyvetin sisätilavuutta, ei kymmentä tippaa. Loppuhuuhtelu metanolilla tai etanolilla on erittäin suositeltavaa CD-työssä, koska metanoli haihtuu nopeasti ja estää vesipisteiden muodostumista. Tunnettu CD-protokolla esimerkiksi määrittelee huuhtelun vedellä ja metanolilla käyttämällä kyvetin puhdistusjärjestelmää ja kuivaamisen typellä; tämä yksinkertainen kaava on edelleen rutiinityön vertailukohta.
| Vaihe | Ratkaisu | Yhteydenottoaika | Miksi sillä on väliä |
|---|---|---|---|
| Poista massanäyte | Näytepuskuri | Muutama sekunti | Estää proteiinin adsorption kuivuvasta meniskistä |
| Huuhtelu vedellä | Ultrapuhdas vesi | 10-15 osaa | Poistaa suolat ja eniten löysästi sidotut materiaalit |
| Pesuainepesu | 1-2 % neutraali kvartsin kanssa yhteensopiva pinta-aktiivinen aine | 5-10 minuuttia | Liukoo proteiini- ja lipidikalvot |
| Pesuaineen poistohuuhtelu | Ultrapuhdas vesi | 10-15 osaa | Pesuainejäännös imee alle 220 nm:n, joten huuhtelun tulee olla runsasta |
| Liuotinhuuhtelu | Optinen metanoli tai etanoli | 2-3 osaa | Syrjäyttää veden, liuottaa orgaanisia jäämiä, nopeuttaa kuivumista |
| Kuivaus | Suodatettua typpeä tai puhdasta kuivaa ilmaa | Kunnes täysin kuiva | Estää vesiläiskiä ja mineraaliesiintymiä |
Kyvetin rakenne vaikuttaa myös päivittäisen protokollan luotettavuuteen. Täysin sulatetussa yksiosaisessa kennossa ei ole sementoituja saumoja, jotka voivat vangita liuotinta tai irrota toistuvan puhdistuksen jälkeen. Tämän tyyppiset kvartsikyvetit voidaan tarvittaessa sonikoida, kun taas kaksiosaisia sementoituja kennoja on käsiteltävä hellävaraisemmin. Kun valitset uutta kyvettiä CD-työhön, kannattaa tarkistaa, että optiset pinnat ovat kiillotettua sulatettua piidioksidia ja että geometria on täysin sulatettu.
Sulatettu piidioksidikvartsikyvetti UV-Visalle ja fluoresenssille Tämä täysin sulatettu kvartsikyvetti sopii absorbanssille ja fluoresenssille 170-2700 nm. Sen kiillotetut optiset pinnat ja vankka rakenne tukevat syväpuhdistusta ja luotettavaa päivittäistä tarkistusta. Näytä tuote → Kun kyvetin tarkistus epäonnistuu päivittäisen protokollan jälkeen, syvempi puhdistus on perusteltua. Keskeisenä periaatteena on valita reagenssi, joka hyökkää kerrokseen hyökkäämättä kvartsia vastaan. Sulattu piidioksidi on kemiallisesti kestävää, mutta se ei ole tuhoutumaton: se liukenee fluorivetyhappoon ja etsautuu hitaasti kuumaan väkevään alkaliin. Jokainen alla oleva syväpuhdistusresepti noudattaa näitä rajoja.
Proteiinikalvot poistetaan parhaiten ruuansulatuksen avulla kuin väkivaltaisen kemian avulla. Tavanomainen lähestymistapa on pepsiiniliuos pitoisuudella 1 - 2 mg/ml 0,1 M suolahapossa, inkuboituna 37 celsiusasteessa yhdestä kahteen tuntia. Entsyymi pilkkoo adsorboituneen proteiinin pieniksi peptideiksi, jotka huuhtoutuvat helposti pois. Inkuboinnin jälkeen huuhtele kyvetti huolellisesti ultrapuhtaalla vedellä, sitten metanolilla ja kuivaa sitten typellä. Toinen tehokas vaihtoehto on 0,5-1-prosenttinen natriumdodekyylisulfaattiliuos, joka on lämmitetty 40-50 celsiusasteeseen, joka liuottaa proteiineja ja lipidejä; se on huuhdeltava vielä perusteellisemmin, koska SDS itse imeytyy kauko-UV: ssa.
Suolahilse ja mineraaliesiintymät reagoivat laimeaan happoon. Typpihappo 1-2 M on tavallinen valinta, koska se liuottaa useimmat epäorgaaniset jäämät eikä jätä mitään omaa huuhtelun jälkeen. Liota 15-30 minuuttia huoneenlämmössä. Älä yhdistä happopuhdistusta sonikointiin, koska tärinä vaikuttaa paljaisiin maan reunoihin ja nopeuttaa reaktiota. Yleiset orgaaniset kalvot poistetaan liuotinsarjalla: metanoli, sitten asetoni, sitten etanoli, sitten vesi. Tämä sarja alkaa veteen sekoittuvalla liuottimella, liuottaa hydrofobiset kalvot ja päättyy liuottimeen, joka sekoittuu veteen niin, ettei saostumisvaihetta tapahdu. Viimeinen vesihuuhtelu poistaa kaikki jäämät orgaanisista liuottimista. Asetoni ei yksinään ole ihanteellinen ensimmäisenä vaiheena märän suolan saastuttamassa kyvetissä, koska asetoni saostaa suoloja ja voi kiinnittää proteiineja pinnalle.
Irrotettavat kyvetit tarvitsevat erilaista tekniikkaa. Ikkunat on erotettava toisistaan, puhdistettava yksitellen tasaisella PTFE- tai puhdastilapyyhepinnalla liuottimella kostutetulla nukkaamattomalla liinalla ja kuivataan puhtaalla ilmavirralla. Metallikotelon liiallinen kiristäminen puhdistuksen jälkeen on yleinen virhe; se vääristää ikkunoita ja luo jännityskaksitaitteisuutta, jota CD-mittaus ei voi sietää. Kokoa sormitiukka ja pieni osa käännöstä ja tarkista polun pituus vertailuliuoksella.
| Talletus | Suositeltu menettely | Yhteydenottoaika | Älä koskaan käytä |
|---|---|---|---|
| Adsorboitu proteiinikalvo | Pepsiini 1-2 mg/ml 0,1 M HCl:ssa 37 celsiusasteessa | 1-2 tuntia | Kuuma tiivistetty alkali |
| Suola- ja mineraaliasteikko | 1-2 M typpihappoa huoneenlämpötilassa | 15-30 minuuttia | Fluorivetyhappo tai mikä tahansa fluoripuhdistusaine |
| Lipidikalvo | 1-2 % neutraalia pinta-aktiivista ainetta 40 asteessa | 10-15 minuuttia | Hiomatyynyt tai jauheet |
| Yleinen orgaaninen esiintymä | Metanoli, sitten asetoni, sitten etanoli, sitten vesi | 2-3 osaa of each | Kuivapyyhintä talouspaperilla |
| Tuntematon tai sekoitettu talletus | 10 % typpihappoa ja sen jälkeen 1-2 % pinta-aktiivista ainetta | 30 minuuttia kukin | Itsekuumenevat seokset, kuten kuuma piraijaliuos |
Ultraäänipuhdistus voi nopeuttaa kaikkia yllä olevia toimenpiteitä, mutta vain täysin sulatetuille yksiosaisille kyveteille. Jos kyvetissä on sementoitu ikkuna, liitos voi vuotaa tai epäonnistua ultraäänivärähtelyn vaikutuksesta. Jos olet epävarma, tarkista toimittajan dokumentaatio ennen kyvetin laittamista ultraäänihauteeseen. Tilavasta paksuseinämäisestä kvartsista valmistettu kyvetti kestää tavallisia 5–10 minuutin laboratoriosonikointijaksoja, mutta ohutseinäiset fluoresenssisolut ovat hauraampia.
Suurin osa pysyvistä kyvettivaurioista ei johdu näytteistä vaan puhdistusvirheistä. Itse materiaali on kemiallisesti stabiilia, mutta ohuet kiillotetut ikkunat ovat herkkiä reagensseille, hankausaineille ja huolimattomalle käsittelylle. Vikatilojen ymmärtäminen suojaa sekä kyvetin että CD-levyn tiedot. Alla olevassa taulukossa on yhteenveto yleisimmistä virheistä ja niiden seurauksista.
| Virhe | Välitön vaikutus | Pitkäaikainen vahinko |
|---|---|---|
| Puhdistus fluorivetyhapolla tai fluorituotteilla | Ikkuna muuttuu pilviseksi muutamassa minuutissa | Piidioksidi on liuennut; solu on romutettava |
| Kuuma konsentroitu NaOH tai KOH | Pinta alkaa jäätyä | Pysyvä etsaus ja voimakas valonsironta |
| Hankaustyynyt, hiomajauheet tai metallityökalut | Kasvoille ilmestyy mikronaarmuja | Scatter ja näennäisiä CD-artefakteja, jotka jäljittelevät todellisia bändejä |
| Kuivapyyhintä talouspaperilla | Näkyvää sameutta ja nukkaa | Kiillotetun kvartsin peruuttamaton naarmuuntuminen |
| Ultraäänikylpy sementoiduille soluille | Liitos saattaa vuotaa tai avautua | Solu menettää polunpituuden kalibroinnin |
| Orgaaninen liuotin ennen vesipitoisten suolojen poistamista | Suolakiteet saostuvat | Kiteet voivat naarmuttaa kennoa pyyhkiessään |
| Näyte jätettiin kammioon yön yli | Muodostuu kova proteiini- ja suolakalvo | Vaatii aggressiivista puhdistusta, joka voi itse vahingoittaa pintaa |
| Huuhtelu vesijohtovedellä | Metalli-ionit kerrostuvat piidioksidille | UV-absorptio ja ylimääräinen perusviivan poikkeama |
| Toistuva koottujen kennojen autoklavointi | Asteittainen stressin kertyminen | Jännityskaksitaitteisuus ja vääristynyt CD-perusviiva |
Piranha-liuosta, väkevän rikkihapon ja vetyperoksidin seosta, käytetään joskus mikroelektroniikan puhdistuksessa. Optisille kyveteille sitä ei yleensä suositella. Reaktio on eksoterminen ja voi syövyttää tai samentaa kvartsia, jos lämpötila nousee; se muodostaa myös vakavan laboratorioturvallisuuden vaaran. Jos kerros vastustaa typpihappoa ja pesuainetta, kyvetti vaihdetaan taloudellisemmin kuin piraijakylvyssä riski.
Todentaminen on vaihe, jonka useimmat laboratoriot ohittavat, ja se on vaihe, joka havaitsee ongelmat ennen tiedonkeruuta. Pelkkä visuaalinen tarkistus ei riitä, koska useimmat CD-levyt ovat yksikerroksisia. Seuraava sekvenssi siirtyy yksinkertaisesta tarkastuksesta instrumenttipohjaisiin testeihin.
Kyvetti voidaan silti säästää
| Kyvetti on vaihdettava
|
Yllä olevat kynnysarvot ovat käytännön oletusarvoja, joita käytetään proteiini-CD-laboratorioissa. Kyvetti, joka läpäisee kaikki kuusi tarkistusta, ei ole mittaustasi rajoittava tekijä. Jos vahvistus epäonnistuu, toista syväpuhdistus kerran; Jos se epäonnistuu uudelleen, vaihda kenno sen sijaan, että käytät enemmän tunteja menetettyyn asiaan.
Paras puhdistusprotokolla alkaa ostopäätöksestä. Oikein CD-levylle määritetty kyvetti puhdistaa nopeammin, varmistaa helpommin ja tuottaa paremmin toistettavia perusviivoja elinkaarensa aikana. Kolme päätöstä hallitsee: materiaalilaatu, solurakenne ja polun pituus.
Materiaaliluokka määrittää lyhimmän käytettävän aallonpituuden. Alle 210 nm:n kauko-UV-CD:lle määritä synteettinen sulatettu JGS1-piidioksidi, jonka läpäisy on dokumentoitu alueella 170–220 nm. JGS2-sulatettu kvartsi on hyväksyttävä yli 210 nm:n mittauksiin. Arvosana tulee mainita toimittajan todistuksessa; Jos näin ei ole, kyvettiä ei todennäköisesti ole tarkoitettu CD-levyille. Rakenne määrittää siivouksen yhteensopivuuden. Täysin sulatetuissa yksiosaisissa kennoissa ei ole orgaanista liimaa, ja ne voidaan liottaa missä tahansa yllä luetellussa puhdistusliuoksessa, mukaan lukien lyhyt sonikointi. Sementoidut solut ovat halvempia, mutta eivät sovellu aggressiiviseen puhdistukseen. Irrotettavat kennot tarjoavat parhaan pääsyn ikkunoihin syväpuhdistusta varten, ja ne ovat vakiovalinta erittäin lyhyille poluille. Alla olevissa korteissa on yhteenveto vakiopoluista ja niiden suositelluista CD-sovelluksista.
Käytä väkevöityihin proteiininäytteisiin ja mittauksiin 185 nm asti. Näytteen tilavuus noin 10-20 µL. Toimitetaan usein irrotettavana kennona kuplien juuttumisen välttämiseksi.
Hyvä kompromissi kauko-UV-CD:lle 185-220 nm. Tilavuus noin 50-100 µl. Suositellaan 5-20 mg/ml proteiiniliuoksille.
Yleisin CD-polku. Tilavuus noin 100-200 µl. Soveltuu kauko-UV- ja lähi-UV-mittauksiin kohtalaisilla näytepitoisuuksilla.
Laajentaa herkkyyttä lähes UV-CD-levyille sallien silti työskentelyn kauko-UV-säteilyssä. Tilavuus noin 200-400 µl.
Paras aromaattisten jäämien ja kofaktorien lähes UV-CD:lle yli 250 nm. Tilavuus noin 500-1000 µl.
Vakiopolun pituus UV-Vis- ja lähes UV-CD:lle; yleensä liian absorboiva kauko-UV:lle alle 200 nm vesipitoisilla puskureilla. Tilavuus noin 1-2 ml.
Harkitse koko optista polkua polun pituuden ulkopuolella. Ikkunan pinnat on kiillotettava vähän naarmuuntumista aiheuttavaan spesifikaatioon, ja kyvetissä ei saa olla jännityskaksitaitteisuutta; yksinkertainen testi ristikkäisten polarisaattorien välillä paljastaa liiallisen rasituksen. Kyvetit, joissa on mustat seinät tai peitetyt ikkunat, ovat hyödyllisiä fluoresenssitutkimuksissa, mutta ne ovat tarpeettomia tavallisille CD-levyille. Metalliton rakenne on etu, jos kyvettiä käytetään metallirunkoja hyökkäävien puskureiden kanssa.
Läpinäkyvä kvartsilasikyvetti optisille instrumenteille Tämä UV-Vis- ja fluoresenssispektrofotometreille suunniteltu kvartsikyvetti kestää useimpia kemikaaleja ja kestää korkeita käyttölämpötiloja. Sen optinen kirkkaus ja kestävyys tekevät käsittelystä ja pitkäaikaisesta säilytyksestä käytännöllisen. Näytä tuote → Se, miten kyvettiä säilytetään ja käsitellään mittausten välillä, määrää, kuinka usein se on puhdistettava. Sulatetut silika-ikkunat keräävät kalvoja ilmassa olevasta pölystä, sormenjäljistä ja jopa samassa kaapissa säilytettävistä orgaanisten liuottimien höyryistä. Seuraavat tavat pitävät kyvetin optisessa kunnossa vuosia.
Käsittelysäännöt: pidä kyvetistä kiinni vain himmeistä sivuseinistä tai yläreunasta, käytä puuterittomia nitriilikäsineitä ja käytä PTFE-kärkisiä pinsettejä siirtäessäsi kennoa. Älä koskaan kosketa kiillotettuja optisia pintoja. Käytä säilytykseen ja kuljetukseen erityistä pehmeävuorattua kyvettikoteloa ja pidä solut pystyasennossa tai tasaisesti puhtaalle nukkaamattomalle pinnalle. Lasi lasiin kosketus, joka tapahtuu, kun kyvetit pinotaan laatikkoon, on yleinen reunalastujen lähde.
Säilytyssäännöt: säilytä kyvetit tyhjinä ja kuivina korkki tai tulppa poistettuna tai löysästi asetettuna, jotta kosteus ei tiivisty sisälle. Älä säilytä kyvettejä liuottimeen, metanoliin tai veteen upotettuna. pitkä liuotinkosketus voi pehmentää sementoituja soluja, ja seisova vesi edistää levien tai bakteerien muodostumista. Puhdista varastoitu kyvetti uudelleen, kun se on ollut käyttämättömänä yli viikon, koska jopa pölyttömän säilytyksen ansiosta ohut orgaaninen kalvo kerääntyy sulatetun piidioksidin päälle.
Huoltoaikataulu: tarkasta kaikki CD-kyvetit viikoittain näkyvien kalvojen ja naarmujen varalta; syväpuhdista ne kuukausittain tai aikaisemmin, jos perustarkistukset eivät ole enää puhtaita; vaihda kyvetti kahden peräkkäisen epäonnistuneen tarkastuksen jälkeen. Jos laboratorio käyttää CD-levyä päivittäin, säilytä vähintään kaksi vastaavaa kyvettiä puskurijärjestelmää kohti, jotta toinen voidaan puhdistaa toisen käytön aikana. Nopea UV-Vis-läpäisyskannaus puhtaalla tyhjällä kyvetillä muutaman kuukauden välein dokumentoi, ikääntyykö ikkuna hitaasti.
Laboratorioiden, jakelijoiden ja OEM-ostajien kannalta kyvetin pitkän aikavälin kustannuksia hallitsee sen konsistenssi ja puhdistettavuus, ei sen alkuperäinen hinta. Kvartsivalmistajan kyvetti, jossa on valvottua optista laatua olevaa raaka-ainetta ja dokumentoitua käsittelyä, puhdistaa toistettavasti vuosia; halpa, epävarman luokan solu tuottaa hienovaraisia perustason vaihteluita, joita on vaikea jäljittää. Siksi hankintoja tulee käsitellä osana laatujärjestelmää.
Kun pyydät tarjousta kvartsikyvetin valmistajalta tai toimittajalta, pyydä erityisiä asiakirjoja. Materiaalilajiksi tulee ilmoittaa JGS1, JGS2 tai vastaava kansainvälinen merkintä. Toimittajan tulee toimittaa mitattu läpäisykäyrä alueella 190–260 nm, kulkureitin toleranssi plus tai miinus 0,01 mm tai parempi ja vahvistus siitä, että ikkunat ovat jännitteettömiä. CD-työssä venymättömyys on tärkeämpää kuin UV-Visissä, koska kahtaistaitteisuus luo suoran optisen artefaktin. Pyydä myös kennon puhdistusyhteensopivuus: onko se täysin sulatettu vai sementoitu ja onko se sonikoitu.
Määrää ostaville tukkukauppiaille ja jakelijoille pakkaus ja jäljitettävyys ovat yhtä tärkeitä kuin optiikka. Solut tulee toimittaa yksittäisissä suojakoteloissa, joissa on eränumerot etiketissä. Erien välinen johdonmukaisuus on kriittinen; sertifikaatti jokaiselle erälle estää tilanteen, jossa yksi kyvetti käyttäytyy eri tavalla kuin toinen. Kannattaa kysyä, tarjoaako valmistaja mukautettuja mittoja, irrotettavia malleja ja mukautettuja ikkunoita ilman suuria vähimmäistilausmääriä. Yancheng Mingyang Quartz Products Co., Ltd. on kvartsituotteiden valmistaja Yanchengissä Kiinassa, ja se toimii Jinzhou Mingde Quartz Glass Co., Ltd:n tuotantolaitoksena; Yritys valmistaa kvartsikyvettejä, laboratoriokvartsiesineitä, optisia kvartsilevyjä ja räätälöityjä kvartsikomponentteja laboratorio- ja teollisuusasiakkaille maailmanlaajuisesti. Suora valmistajasuhde antaa ostajalle mahdollisuuden hallita laatua, sertifiointia ja mukautettua valmistusta.
Onko olemassa parasta menetelmää kvartsikyvettien puhdistamiseen CD-spektroskopiaa varten?Luotettavin menetelmä on vakiojärjestys: tyhjennä näyte, huuhtele puskurilla, huuhtele ultrapuhtaalla vedellä, pese 1-2-prosenttisella neutraalilla kvartsiyhteensopivalla pesuaineella, huuhtele uudelleen vedellä, huuhtele metanolilla tai etanolilla ja kuivaa typellä. Tärkeää ei ole koskaan antaa näytteen kuivua kennossa ja varmistaa tulos 220 nm:n vesiperusviivalla. |
Voinko käyttää ultraäänikylpyä CD-kvartsikyvettien puhdistamiseen?Vain jos kyvetissä on täysin sulatettu yksiosainen rakenne. Sementoidut tai kaksiosaiset kyvetit voivat irrota tai vuotaa ultraäänivärähtelyn vaikutuksesta. Tarkista valmistajan dokumentaatio; Jos olet epävarma, käytä sen sijaan manuaalista liotusta. |
Kuinka poistan proteiinikalvon, joka ei irtoa pesuaineella?Käytä entsymaattista digestiota, kuten pepsiiniä 1-2 mg/ml 0,1 M suolahapossa 37 celsiusasteessa yhdestä kahteen tuntia. Huuhtele huolellisesti jälkeenpäin. Vältä kuumaa natriumhydroksidia, joka syövyttää kvartsiikkunan. |
Vaikuttaako sormenjälki todella CD-mittauksiin?Kyllä, ja dramaattisesti. Sormenjälkijäämät sisältävät aminohappoja ja rasvahappoja, jotka absorboivat alle 250 nm:n; yksi vahingossa tapahtuva kosketus voi lisätä 0,05–0,1 AU:ta 220 nm:ssä ja tuhota perusviivan tasaisuuden. Käsittele kyvettejä aina himmeistä seinistä ja käytä puuterittomia käsineitä. |
Kuinka usein kvartsikyvetit tulee puhdistaa CD-spektroskopiaa varten?Jokaisen käytön jälkeen, varsinkin kun näyte sisältää proteiineja, lipidejä tai suoloja. Tyhjennä ja huuhtele kyvetti heti mittauksen jälkeen. Kyvetit, jotka ovat olleet käyttämättömänä yli viikon, tulee puhdistaa uudelleen ennen seuraavaa mittaussarjaa. |
Milloin kvartsikyvetti tulisi vaihtaa puhdistuksen sijaan?Vaihda kyvetti, kun kaksi peräkkäistä syväpuhdistusjaksoa ei palauta perusviivaa, kun näkyvä naarmu ylittää optisen pinnan, kun kenno vuotaa tai kun pinnan huurre viittaa syövytykseen. Oikein käsitelty sulatettu piidioksidikyvetti voi kestää vuosia; tavanomaiset syyt varhaiseen epäonnistumiseen ovat fluorivetyhappo, kuuma väkevä alkali ja mekaaninen hankaus. |
Katso kyvettien tekniset tiedot, vakiogeometriat ja tuotantovalikoimasta saatavilla olevat kvartsilaadut kvartsikyvetit spektroskopiaan sivulle.
Jos CD-sovelluksesi tarvitsee standardista poikkeavan polun, irrotettavan rakenteen tai tietyn sulatetun piidioksidilaadun, räätälöity kvartsiesineiden valmistus palvelu tukee kerta- ja erätuotantoa.
Kvartsituotteiden valmistajana ja toimittajana Yancheng Mingyang Quartz Products Co., Ltd. valmistaa kvartsikyvettejä, laboratoriokvartsiastioita, optisia kvartsilevyjä ja niihin liittyviä komponentteja CD-spektroskopiaan, UV-Vis-analyysiin ja muihin optisiin sovelluksiin. Yritys toimii Jinzhou Mingde Quartz Glass Co., Ltd.:n tuotantolaitoksena palvellen laboratorio-, teollisuus- ja tukkuasiakkaita maailmanlaajuisilla markkinoilla.